Guvernör Ron DeSantis skrev på måndagen under den kontroversiella lagen.
Motståndet mot lagen, som kritikerna kallar "Don't say gay"-lagen, har varit brett. Hbtq-aktivister, studenter, underhållningsindustrin och Vita huset har kritiserat den.
DeSantis, en potentiell framtida presidentkandidat för Republikanerna, har beskrivit lagen som en rimlig avvägning som ger föräldrar möjlighet att stämma den skolförvaltning som bryter mot reglerna.
– Vi kommer att säkerställa att föräldrarna kan skicka sina barn till skolan för att få utbildning, inte indoktrinering, sade guvernören i samband med att lagen skrevs under.
Lagen har kritiserats för att vara vagt formulerad, vilket skapat oro bland lärare.
– Jag har hela tiden sett den som en lösning i jakt på ett problem, säger Palm Beach-läraren Michael Woods.