Ytterligare 145 personer skadades i kraschen, enligt spanska El País.
På onsdagen startade rättegången kring den förödande olyckan, den allvarligaste att drabba landet på 40 år. Åklagarna yrkar på fyraåriga fängelsestraff för tågföraren samt en tidigare säkerhetschef vid järnvägsföretaget ADIF.
– I dag känner vi trötthet, sorg och ilska tillsammans med en önskan om att den här mardrömmen tar slut. Vi vill äntligen få veta allt som gick fel, säger María Ángeles Prado som förlorade sin 21-åriga dotter och sin brorsdotter i olyckan.
Fyra vagnar välte och staplades på varandra som ett dragspel i kraschen den 24 juli 2013. Kaosartade scener utspelade sig på olycksplatsen, där rök steg från vagnarna och livlösa kroppar låg utkastade längs spåren. Många passagerare fastnade i de hopknycklade vagnarna.
Utredningen visade att tåget färdades i närmare 180 kilometer i timmen, mer än dubbelt så snabbt som den tillåtna hastigheten.
En anhörigförening kritiserar rättsväsendet för att det tagit så många år att få en rättegång till stånd.
"Vissa av offren och släktingarna har dött under åren (som gått sedan olyckan). För dem skipas aldrig rättvisa och tyvärr kan inget göras åt den saken", säger gruppen i ett uttalande, enligt den spanska nyhetsbyrån Efe.
Offren begär skadestånd på motsvarande över 630 miljoner kronor. 669 vittnen ska höras under rättegången, som beräknas pågå i flera månader.